操作流程:
1.將T-Pro LumiFast Chemiluminescence Detection Kit & T-Pro LumiFast Plus Chemiluminescence Detection Kit 中的試劑A及試劑B等體積混合至足夠蓋過membrane的使用量(平均用量最少為0.1ml/cm2)。於室溫使此混合試劑均勻混合作用1-2分鐘。
2.將membrane上過量的緩衝液倒掉,但要保持轉漬膜的濕潤。加入步驟1混合好的試劑於轉漬膜上,在室溫下作用1-2分鐘。
3.將步驟2過多的混合試劑倒掉,且將轉漬膜置於兩層保鮮膜中間或用兩片透明塑膠片密封,注意不可以有氣泡,並將轉漬膜吸附蛋白正面朝上,同時轉漬膜請勿過濕。
4.將步驟3轉漬膜置入底片夾中。置入底片,要避光或是使用紅光。曝光約30至90秒。
5.置入新的底片前,請先將原先片夾中的底片取出,並將底片放入顯影劑中。
6.第二張底片的曝光時間可依據第一張的時間做調整。
7.如果訊號過強,可在加入呈色劑15~30分鐘後再進行壓片,或作其他時間的調整。
注意事項:
1.轉漬膜在接上一級抗體後須保持濕潤,不能乾掉。
2.請在壓片前再配製化學發光試劑,配製量足夠覆蓋轉漬膜即可,勿將使用過混合試劑重複或混合使用。
3.請使用乾淨微量吸管(Tip)並單一取用每種試劑,勿重複多次試用避免污染。
4.除了取用底片、壓片曝光及洗片處理外,其他步驟可不必在暗室中操作。
5.壓片後轉漬膜可經由T-Pro Western Blot Stripping Reagent (JB11-K002) 洗去原有抗體後,重複再次使用。